GenBilim
Türkiye Bilim Sitesi  
Anasayfa | Forum | Bilimler | Arşiv Tarama | GenKalem | Destek | Site Haritası | Linkler | RSS | Reklam | Arkadaşını Davet Et | İletişim
Kontrol Paneli Anasayfa arrow Forum Kontrol Paneli Kontrol Paneli Kontrol Paneli Kontrol Paneli Üye OlŞifre Hatırlat Kontrol Paneli
Sayfa: [1]   Aşağı git
Yazdır
Gönderen Konu: DNA İZOLASYONU  (Okunma Sayısı 3190 defa)
0 Üye ve 0 Ziyaretçi konuyu incelemekte.

Uzman Üye
*****
Offline Offline
Mesaj Sayısı: 141
Üyelik Bilgileri
« : 14 Nisan 2006 - 21:41:44 »

en altta adresini ekleyeceğim akynakta DNA izolasyonunun nasıl yapıldığını buldum ve sizlerle paylaşmak istedim. söylediğim gibi benim yazdığım bir yazı değil, başka kaynaktan buldu veee işte o yazı   :


Aşağıda yazdığım tekniklerden farklı teknikler de geliştirilmiş olup, benim bahsedeceğim yöntem bizim Hacettepe Üniversitesi Tıp Fakültesi, Tıbbi Biyoloji ABD laboratuarlarında kullandığımız yöntemdir. Her hakkı saklıdır. J

Biz DNA’yı izole etmek için ulaşılması en kolay olan kan dokuyu tercih ediyoruz. Eritrositler nükleuslarını kaybettiklerinden kullandığımız asıl hücreler lenfositlerdir.

Buyrun adım adım inceleyelim izolasyon basamaklarını;

1.Gelen kanda plazma ve hematokrit kısımları ayrılmışsa çalkalayarak birbirine tekrar karışmasını sağlıyoruz.
2.Bu kanı daha geniş ve derin bir deney tüpüne alıyoruz ve içine 45 ml. hizasına gelene kadar (bu rakamlar çok kati rakamlar olmayıp göz kararı da konabilir.) distile saf su ilave ediyoruz. Bu işlemi yapmamızın amacı, eritrositleri yarattığımız hipotonik ortamda hemolize uğratmak. Bu suyu ekledikten sonra bunları çalkalıyor ve 2500 RPM de 20 dakika kadar santrifüj ediyoruz.
3.Santrifüj işleminden sonra tüpün dibine baktığımızda tüpün bir kenarına yapışmış vaziyette beyazlık görebiliriz. Bu beyazlık lenfositler. Tüpün üst kısmındaki sıvıyı boşaltıyoruz lenfositleri yapıştığı yerden kaldırmadan..
4.Bu lenfosit tabakasının üzerine yeniden distile su ekliyor ve Vartox* ediyoruz. Çalkalanan lenfositler zaten yapıştığı yerden kalkıyor distile su içinde ve biz bu sıvıyı yeniden 2500 RPM’de 20 dakika kadar santrifüj ediyoruz.
5.Tekrar üst kısmını döküyoruz. Daha sonra elimizdeki bu tüpün içine 3 ml. Nuclei Lisis Buffer ekliyoruz.
6.Daha sonra 150 microlitre de Proteinase K solüsyonu ekliyoruz.
7.Proteinase K dan sonra 200 microlitre de SDS Buffer eklediğimiz içinde lenfositler bulunan tüpü 1 gece ortalama 37 santigrat derede bekletiyoruz.
8.Ertesi gün perişan olmuş halde elimize geçen tüpün içine sanki koyduklarımız yetmiyormuş gibi 1ml. De amonyum asetat ekliyoruz ve Vartox ediyoruz tekrar.
9.20 dakika da oda ısısında beklettikten sonra 5000 RPM’de 20 dakika santrifüj ediyoruz.
10.Bu defa da tüpün üst kısmını başka bir tüpe aktarıp, geri kalanını atıyoruz tıbbi atık kutumuzaaa.
11.Elimizdeki çözeltinin tüpte uzunlamasına gösterdiği değerin yaklaşık 2 katı kadar alkol ekliyoruz.
12.Ve inanılmaz duygu. DNA tüpün içinde toplanmaya başlıyor ve siz de çıplak gözle görebiliyorsunuz. Ben ilk gördüğümde gözlerim bile doldu vallahi J.
13.Neyyyysee bu kocaman DNA topluluğunu 400 microlitre Te-Buffer içine atıyoruz ve nam-ı diğer deoksiribonükleik asitimizi kaldırıyoruz!!!

*Vartox bizim Hacettepe’de kullandığımız ve tüpleri hızla çalkalayan ve hiç de kompleks olmayan bir gereç.


KAYNAK:http://www.bilimfeneri.gen.tr/phpBB2/viewtopic.php?t=2609&sid=d221009f3c0b0484b5d81310c4d7204f
Logged

Kişinin bilmediği ya da hiçbir şekilde fikrinin olmadığı düşünceler gece kafasının labirentlerinde dolaşır.-Goethe
Uzman Üye
*****
Offline Offline
Mesaj Sayısı: 145
Üyelik Bilgileri
« Yanıtla #1 : 14 Nisan 2006 - 22:17:43 »

gözle nasıl görülebiliyor?fotoğrafları olsa daha iyi olurdu. deneyi evde yapmak için hazırlıklara başladım.tek bulmam gereken 150 microlitre de Proteinase K solüsyonu . vartox işini çay kaşığıyla halledeceğiz artık.
Logged
Uzman Üye
*****
Offline Offline
Mesaj Sayısı: 141
Üyelik Bilgileri
« Yanıtla #2 : 14 Nisan 2006 - 22:23:15 »

aslında ben bu deneyi okulda yapmıştım ama burada anlatılan yöntemlerdeki gibi değildi. daha farklı amlzemeler kullanılıyordu ve kendim bir DNA görüntüleme cihazı yapmıştım. ne günlerdi ama...
Logged

Kişinin bilmediği ya da hiçbir şekilde fikrinin olmadığı düşünceler gece kafasının labirentlerinde dolaşır.-Goethe
Uzman Üye
*****
Offline Offline
Mesaj Sayısı: 145
Üyelik Bilgileri
« Yanıtla #3 : 14 Nisan 2006 - 22:25:08 »

bende bir yöntem buldum.(hir bir hakkı saklı değil)
MİKROORGANİZMA DNA İZOLASYON PROTOKOLÜ

DZ  DNA Isolasyon Kiti  ( Mikroorganizma için)
( Sol A ,Sol B , Sol C , Sol D ve Sol E)

Sürüntüden DNA izolasyonu:
         
      Sürüntü pamuk uçlu eküvyon ile alınmış ise;
      
      1,5 ml ependorf tüp  içine 500 µl solüsyon B koyulur. Eküvyonun örnek alınmış ucu ependorf içine daldırılır ve 10 dakika bekletilir.  Eküvyon alınır. İçine 10µl  Sol A eklenir.  2. adımdan prosedüre devam edilir.

     Serumdan DNA izolasyonu;

1.   1,5 ml’lik ependorf  tüp içine   10 µl Sol A ,  üzerine 250 µl  hasta serumu ve  500 µl Sol B koyulur.
2.   Tüp, solüsyonların karışması için  alt – üst edilir ve enzimin aktif ısısı olan  42˚C de 1 saat inkübe edilir.
3.   İnkübasyondan sonra tüpe  500 µl Sol C ( İki fazlıdır. Alt fazdan alınmalıdır.) koyulur.
4.   Vortekslenir (Süt kıvamında bir sıvı oluşacaktır.)ve 10.000 rpm’de 5 dk santrifüj edilir.
5.   Santrifüjden sonra tüpte 2 faz oluştuğu görülür.  Berrak olan üst  kısım temiz bir  ependorfa alınarak, üzerine 500 µl sol D koyulur ve  hafifçe vortekslenir.
6.   Sonra 10.000 rpm de 10 dk santrifüj edilir.
7.   Süpernatant atılır  ve  üzerine 500 µl Sol E koyulur.
8.   10.000 rpm de 5 dk santrifüj edilir.
9.   Süpernatant atılır. Tüpler  37 ˚C etüve koyularak alkol uçurulur.
10.5 dk sonra  50 µl distile su ile sulandırılır ve bakteri DNA’sı elde edilmiştir.
Logged
Uzman Üye
*****
Offline Offline
Mesaj Sayısı: 141
Üyelik Bilgileri
« Yanıtla #4 : 14 Nisan 2006 - 22:29:48 »

aslında ben bu deneyi okulda yapmıştım ama burada anlatılan yöntemlerdeki gibi değildi. daha farklı amlzemeler kullanılıyordu ve kendim bir DNA görüntüleme cihazı yapmıştım. ne günlerdi ama...


şimdi tekrar okuduğumda deneyi aynen böyle yaptığımız aklıma geldi. bu yüzden pardon.
Logged

Kişinin bilmediği ya da hiçbir şekilde fikrinin olmadığı düşünceler gece kafasının labirentlerinde dolaşır.-Goethe
Uzman Üye
*****
Offline Offline
Mesaj Sayısı: 110
Üyelik Bilgileri
« Yanıtla #5 : 30 Nisan 2008 - 21:51:59 »

bende çok meraklı olduğum için geçen sene gazi üniversitesinde bir biyolog ile dna izolasyonu yaptım öncelikle bana gerekli malzemeleri gösterdi nasıl yapacağım hakkında fikrim vardı ama tam olarak toparlayamıyordum elime bir kağıt tutuşturdu ve biryere gitti kağıtta dna izolasyonunu nasıl yapacağım yazıyordu biraz çekindim tek baıma büyük şeylere kalkmadım biraz hazırlandım ve o geldiğinde birlikte izole ettik hala heyecanlanıyorum anlatırken o anda ağladığımı kimseye söylemeyecektim ama söylemş olaym ağladm çünkü genetikle ilgli her adım engel olamadığım b genetik sevgimi artırıyo inanın daha fazlasını yapmak için sabırsızlıkla bekliyorum.
Logged

MÜGENETİK!hedefinize adım adım yaklaşın hedefi gözden kaçırdığınız anda engelleri görmeye başlarsınız.
Tecrübeli Üye
****
Offline Offline
Mesaj Sayısı: 74
Üyelik Bilgileri
« Yanıtla #6 : 20 Mayıs 2008 - 10:19:15 »

merhaba,ben lise öğrencisiyim.ve gecen okul döneminde bilim teknikte gördüğüm bi deneyi uyguladım.Bu deneyin orjinal site adresini de veriyorum isteyen bakabilir.Ama bu deneyden sonra kırmızı küçük yapılar gördüm.Bunlar DNA MIYDI bilmiyorum ama öyle olması gerekiyormuş.Anlayamadığım şey,DNA gözle nasıl görülebiliyor?
http://www.funsci.com/fun3_en/dna/dna.htm
ayrıca herkes bu deneyi kolaylıkla yapabilir...çok zevkli bi deney...:)siteye bakmanızı isterm.:)
Saygılarımla,
Logged

Neden beni kimse anlamıyor ama herkes seviyor?..einstein
Tecrübeli Üye
****
Offline Offline
Mesaj Sayısı: 74
Üyelik Bilgileri
« Yanıtla #7 : 20 Mayıs 2008 - 10:20:48 »

Sedat yalçınkaya,
DNA GÖRÜNTÜLEME CİHAZINI NASIL YAPMIŞTINIZ?AÇIKLARMISINIZ?MERAK ETTİM..
Logged

Neden beni kimse anlamıyor ama herkes seviyor?..einstein
Uzman Üye
*****
Offline Offline
Mesaj Sayısı: 234
Üyelik Bilgileri
« Yanıtla #8 : 20 Mayıs 2008 - 14:27:20 »

merhaba,ben lise öğrencisiyim.ve gecen okul döneminde bilim teknikte gördüğüm bi deneyi uyguladım.Bu deneyin orjinal site adresini de veriyorum isteyen bakabilir.Ama bu deneyden sonra kırmızı küçük yapılar gördüm.Bunlar DNA MIYDI bilmiyorum ama öyle olması gerekiyormuş.Anlayamadığım şey,DNA gözle nasıl görülebiliyor?
http://www.funsci.com/fun3_en/dna/dna.htm
ayrıca herkes bu deneyi kolaylıkla yapabilir...çok zevkli bi deney...:)siteye bakmanızı isterm.:)
Saygılarımla,


 BU SİTEDEKİ DENEYİ DENEMK İSTERİM DOĞRUSU ANCAK BU DENEYİ AÇIKLAYAN TÜRKÇE BİR SİTE YOKMU KOLAY GİBİ GÖRÜNÜYOR AMA ANLAMIYORUM İNGİLİZCESİNİ.RİCA ETSEM TÜRKÇE AÇIKLAMASINI GÖNDEREBİLİRMİSİN?
Logged
Uzman Üye
*****
Offline Offline
Mesaj Sayısı: 110
Üyelik Bilgileri
« Yanıtla #9 : 20 Mayıs 2008 - 18:26:37 »

liseli gen mühendisi adayı!


bizim deney sonucunda gördüğümüz yapıların rengi şaffaftı siz boyamışmıydınız yoksa?
« Son Düzenleme: 20 Mayıs 2008 - 18:28:32 Gönderen: müge kayhan » Logged

MÜGENETİK!hedefinize adım adım yaklaşın hedefi gözden kaçırdığınız anda engelleri görmeye başlarsınız.
Tecrübeli Üye
****
Offline Offline
Mesaj Sayısı: 74
Üyelik Bilgileri
« Yanıtla #10 : 21 Mayıs 2008 - 15:51:11 »

merhaba,ben lise öğrencisiyim.ve gecen okul döneminde bilim teknikte gördüğüm bi deneyi uyguladım.Bu deneyin orjinal site adresini de veriyorum isteyen bakabilir.Ama bu deneyden sonra kırmızı küçük yapılar gördüm.Bunlar DNA MIYDI bilmiyorum ama öyle olması gerekiyormuş.Anlayamadığım şey,DNA gözle nasıl görülebiliyor?
http://www.funsci.com/fun3_en/dna/dna.htm
ayrıca herkes bu deneyi kolaylıkla yapabilir...çok zevkli bi deney...:)siteye bakmanızı isterm.:)
Saygılarımla,


 BU SİTEDEKİ DENEYİ DENEMK İSTERİM DOĞRUSU ANCAK BU DENEYİ AÇIKLAYAN TÜRKÇE BİR SİTE YOKMU KOLAY GİBİ GÖRÜNÜYOR AMA ANLAMIYORUM İNGİLİZCESİNİ.RİCA ETSEM TÜRKÇE AÇIKLAMASINI GÖNDEREBİLİRMİSİN?



BİLİM TEKNİK OCAK SAYISINDA AYRINTILI ANLATIYOR.BİLİM TEKNİK ALIYORSAN PROBLEM YOK.ALMIYOSAN adresim craig_venter@windowslive.com eklersin anlatırım...biraz uzun çünkü....
« Son Düzenleme: 21 Mayıs 2008 - 15:58:33 Gönderen: liseli_gen_mühendisi_adayı genetik » Logged

Neden beni kimse anlamıyor ama herkes seviyor?..einstein
Tecrübeli Üye
****
Offline Offline
Mesaj Sayısı: 74
Üyelik Bilgileri
« Yanıtla #11 : 21 Mayıs 2008 - 15:53:03 »

liseli gen mühendisi adayı!


bizim deney sonucunda gördüğümüz yapıların rengi şaffaftı siz boyamışmıydınız yoksa?


yooo...ben hiç bi boyaa kullanmadım.ama ben muzun dnasını çıkarmıştım.siz farklı bişey yaptıysanız ondan olabilir belki...ama benimn nalayamadığım DNA nın gözle görünmesi ilginç değil mi?onlar çok küçük yapılar deil mi
Logged

Neden beni kimse anlamıyor ama herkes seviyor?..einstein
Uzman Üye
*****
Offline Offline
Mesaj Sayısı: 110
Üyelik Bilgileri
« Yanıtla #12 : 22 Mayıs 2008 - 00:28:01 »

liseli gen mühendisi adayı!


bizim deney sonucunda gördüğümüz yapıların rengi şaffaftı siz boyamışmıydınız yoksa?




yooo...ben hiç bi boyaa kullanmadım.ama ben muzun dnasını çıkarmıştım.siz farklı bişey yaptıysanız ondan olabilir belki...ama benimn nalayamadığım DNA nın gözle görünmesi ilginç değil mi?onlar çok küçük yapılar deil mi


kesinlikle öyleler bende bu soruyu yönelttiğimde gördüğümüz yapıların çok az bir oranda küçüldüğünü daha fazlasını yapamayacağımızı söylediler bana bende kivinin DNA sını çıkarmştm cnm şeffaftı gerçekten gözle görülmesi daha ayrntılı bilgi almadığın için sana abes gelmiştir canım belki ama söylediğim açıklamayı bizzat sorarak öğrendim:)
Logged

MÜGENETİK!hedefinize adım adım yaklaşın hedefi gözden kaçırdığınız anda engelleri görmeye başlarsınız.
Sayfa: [1]   Yukarı git
Yazdır
GenForum - Bilimsel Forumlar - Türkiye Bilim Sitesi  |  Katagoriler  |  Genom Projesi  |  Konu: DNA İZOLASYONU
Gitmek istediğiniz yer:  

Bu Sayfa 0.169 Saniyede 27 Sorgu ile Oluşturuldu
Forumda Arama                   Gelişmiş Arama
Sponsor Bağlantılar
Forum Duyuruları
Forumlarda görüntü kirliliğini önlemek için kayıt olduktan sonra profil resminizi güncellemeyi unutmayınız.
Forum Rütbeleri / Mesaj Sayısı
Yeni Üye < 10
Aktif Üye 10-29
Paylaşımcı Üye 30-49
Tecrübeli Üye 50-99
Uzman Üye > 100
Forum RSS